引言

　　假期就要到了，是不是想要好好放松一下呢？但別忘了，我們的實(shí)驗(yàn)室小伙伴也需要一個(gè)“假期”哦！

　　色譜柱是液相色譜中的核心部件，就像人的心臟一樣重要。它的“心臟”就是固定相，固定相的作用是吸附樣品中的組分，使它們得以分離。因此，保持色譜柱的清潔對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要。今天就讓我們一起給色譜柱“洗個(gè)澡”，讓它煥然一新吧。

SEC色譜柱

　　保存方法

　　日常使用中，賽分科技 SEC色譜柱建議保存在150 mM磷酸鈉緩沖液中(pH 7.0)。如長(zhǎng)期不用時(shí)，則需將色譜柱保存在含0.02% NaN3的150 mM磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)或20%乙醇中，以防止菌體污染。

　　清洗、再生方法

　　多次使用后某些樣品可能會(huì)吸附到入口篩板或填料上，當(dāng)積累至一定程度時(shí)會(huì)出現(xiàn)壓力升高并伴隨峰型展寬的現(xiàn)象，此時(shí)需要清洗色譜柱。

　　一般流程為：斷開(kāi)檢測(cè)器，反接色譜柱，在低于50%最大推薦流速下用清洗液沖洗10-15倍柱體積。

　　推薦清洗溶液有：

　　1 0.5 M硫酸鈉溶液(pH 3.0)：適用于堿性蛋白吸附后的清洗；

　　2 10%-20%有機(jī)溶劑（乙醇、異丙醇、乙腈）：疏水性蛋白吸附后的清洗；

　　3 以上清洗方法無(wú)效時(shí)，可使用4 M尿素(pH 7.0)：適用于易聚集蛋白樣品的清洗。

IEX色譜柱

　　保存方法

　　長(zhǎng)期不用時(shí)，請(qǐng)將Proteomix SAX和WAX柱保存在含0.1%NaN3的20 mM Tris緩沖液(pH 8.0)中。Proteomix SCX 和WCX柱保存在含 0.1%NaN3的20 mM磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)中。色譜柱需要用儲(chǔ)存緩沖溶液沖洗至少15倍柱體積。然后再用隨色譜柱附上的兩個(gè)可拆卸的堵頭塞緊色譜柱的兩端以防止柱床的干涸。

　　過(guò)年期間，Proteomix陰離子交換色譜柱短期保存在20 mM Tris，(pH 8.0)中。陽(yáng)離子交換柱保存在20 mM磷酸鹽緩沖液，(pH 6.0) 中。

　　清洗方法

　　如果預(yù)柱濾片或保護(hù)柱在分離之前曾經(jīng)使用過(guò)，需要首先將預(yù)柱濾片或保護(hù)柱反接用清洗溶液沖洗15-30min。如果經(jīng)過(guò)沖洗效果沒(méi)有得到明顯改善，則需要更換預(yù)柱濾片或保護(hù)柱。

　　在使用過(guò)程中，樣品經(jīng)常會(huì)被吸附在柱入口端的篩板或者填料上。當(dāng)樣品吸附累積到一定程度時(shí)，柱壓將會(huì)升高，色譜峰形也會(huì)出現(xiàn)展寬。這時(shí)就需要清洗色譜柱了。

　　一般流程為：斷開(kāi)檢測(cè)器，反接色譜柱，在低于50%最大推薦流速下用清洗液沖洗10-15倍柱體積。

　　推薦清洗溶液有：

　　1對(duì)于一般親水性較好的蛋白樣品，建議采用 1 M NaCl 溶液清洗 10 倍柱體積。

　　2對(duì)疏水性較強(qiáng)的蛋白樣品，建議采用 20%乙醇清洗 10 倍柱體積 。

　　3對(duì)于Proteomix陰離子交換色譜柱，清洗溶液為含150 mM硝酸鉀的75%乙腈溶液（用HCl調(diào)節(jié)pH至2）。

　　4對(duì)于Proteomix陽(yáng)離子交換色譜柱，清洗溶液為含1.0 M NaCl的 50 mM磷酸鹽緩沖液(pH 10)。

　　再生方法

　　1 對(duì)于陰離子色譜柱(WAX、SAX)，建議采用0.1 M的硫酸溶液清洗10 倍柱體積，然后保存到 20 mM Tris(pH 8.0 )中。

　　2 對(duì)于陽(yáng)離子色譜柱(SCX、WCX)，建議采用0.1 M的硫酸溶液或20 mM NaOH清洗 10倍柱體積,然后保存到20 mM磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)中。

　　怎么樣？是不是覺(jué)得給色譜柱“洗澡”也不是一件簡(jiǎn)單的事情呢？不過(guò)，只要我們用心呵護(hù)，它一定會(huì)回報(bào)我們清晰的色譜峰！假期愉快哦！